pSPYCE-35S BiFC Vector 植物双分子荧光互补载体

产品信息： 

【注意事项】：

（1） 我司提供的所有质粒（载体）仅保证质粒（载体）的关键部位测序正确，不保证实验效果。

（2） 商业化的质粒（载体）即使是开发公司也未做过完整测序。如果测序序列和原始参考序列有99%以上相同，则默认供应载体为正确载体。

（3） 我司质粒（载体）以少量干粉或液体形式提供。以干粉形式提供的质粒（载体）默认规格为2μg（不保证具体量），只保证用户能转化和扩繁到目的质粒。

背景信息

双分子荧光互补技术（Bimolecular Fluorescence Complementation, BiFC），原理在于将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment，C-fragment），将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光下，荧光蛋白发荧光；反之，若A与B蛋白之间无相互作用，则荧光蛋白就不能发光。

根据瞬时表达所需的转化方法来选择所需的载体对，常用的有以下两对（来自文献：Walter M, Chaban C, Schütze K, et al. Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation. The Plant Journal : for Cell and Molecular Biology. 2004 Nov;40(3):428-438. DOI: 10.1111/j.1365-313x.2004.02219.x. PMID: 15469500.）

构建流程：

j 选择待研究的基因构建BiFC载体；

k 通过瞬时表达方法比如：农杆菌浸染法（agro-infiltration）共转载体对；

l 植物活细胞水平观察YFP来源的荧光蛋白表达。

【参考文献】：

1）Wu, Y.; Dong, G.; Luo, F.; Xie, H.; Li, X.; Yan, J. TkJAZs-TkMYC2-TkSRPP/REF Regulates the Biosynthesis of Natural Rubber in Taraxacum kok-saghyz. Plants 2024, 13, 2034. https://doi.org/10.3390/plants13152034

2）Witte, CP., Noël, L., Gielbert, J. et al. Rapid one-step protein purification from plant material using the eight-amino acid StrepII epitope. Plant Mol Biol 55, 135–147 (2004). https://doi.org/10.1007/s11103-004-0501-y

3）Walter, M., Chaban, C., Schütze, K., Batistic, O., Weckermann, K., Näke, C., Blazevic, D., Grefen, C., Schumacher, K., Oecking, C., Harter, K. and Kudla, J. (2004), Visualization of protein interactions in living plant cells using bimolecular fluorescence complementation. The Plant Journal, 40: 428-438. https://doi.org/10.1111/j.1365-313X.2004.02219.x

基本信息

质粒图谱

保存与运输方法

保存：-20℃保存，至少1年有效。 

运输：冰袋运输。

使用方法（供货形式：少量干粉质粒）

【注】：

①以下质粒转化方法仅做参考。实际的转化方法请根据感受态细胞来调整和优化。

②收到质粒后，务必先进行转化，挑取单克隆扩增，提取后再使用。

1）于实验前，将质粒（载体）干粉从低温取出置于室温回温至少20min。于5000rpm低速离心1min，将粉末都沉淀至管底。加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min。

2）从-80℃取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，做好标记。

3）取2μl质粒加至100μl感受态内，冰浴30min。

4）42℃热激60s，冰上静置2min，此过程不可摇动EP管。

5）加入900μl无抗生素的LB液体培养基，180rpm，37℃振荡培养45min。

6）6000rpm离心5min，仅留100μl上清混匀菌体沉淀。

7）将混匀后的菌液加到含相应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂布均匀。

8）将平板正向培养1h，再倒置培养12~16h。

9）挑取单克隆菌落到含相应抗性的LB液体培养基中，220rpm振荡培养12-16h，根据实验需要提取质粒。

【注】：如果转化平板上长的菌落过多，请将质粒按比例稀释后再转化，原则上以能挑取到单克隆为宜。如果没有菌落，则加入10μl质粒转化。请不要直接将质粒转入表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再转入表达感受态。

注意事项

1） 我司提供的载体/质粒/菌株都经过严格的质量控制。请收到货后先进行转化，再挑取单克隆扩增。产品使用中若遇到质量问题，请和我司及时沟通。

2） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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